کیت الایزا ویتامین B12

کیت الایزا ویتامین B12

کیت الایزا ویتامین B12 ابزاری تخصصی است که در آزمایشگاه‌های تشخیص طبی برای اندازه‌گیری دقیق و کمی غلظت ویتامین B12 (کوبالامین) در نمونه‌های سرم خون انسان به کار می‌رود. این کیت‌ها به پزشکان و متخصصان کمک می‌کنند تا کمبود یا سطوح بالای این ویتامین حیاتی را تشخیص دهند.

اساس کار: روش رقابتی ELISA

کیت‌های ویتامین B12 اغلب از تکنیک الایزای رقابتی استفاده می‌کنند. این روش به طور خلاصه به این شکل عمل می‌کند:

1. پوشش چاهک‌ها: سطح داخلی چاهک‌های میکروپلیت با آنتی‌بادی‌های مونوکلونال اختصاصی علیه ویتامین B12 پوشش داده شده است.
2. استخراج و رقابت: ابتدا ویتامین B12 از پروتئین‌های حامل خود در نمونه سرم جدا می‌شود. سپس این نمونه به همراه یک ویتامین B12 کونژوگه‌شده (نشان‌دار شده با آنزیم، مثلاً HRP) به چاهک‌ها اضافه می‌شود. در اینجا، ویتامین B12 موجود در نمونه بیمار و ویتامین B12 کونژوگه‌شده برای اتصال به آنتی‌بادی‌های پوشش‌داده‌شده در چاهک‌ها با یکدیگر رقابت می‌کنند.
3. شستشو و اضافه کردن سوبسترا: پس از دوره انکوباسیون، چاهک‌ها شسته می‌شوند تا ویتامین B12های متصل‌نشده حذف گردند. سپس سوبسترای کروموژن (ماده رنگ‌زا) اضافه می‌شود. آنزیم متصل به ویتامین B12 کونژوگه‌شده با سوبسترا واکنش داده و رنگ تولید می‌کند.
4. اندازه‌گیری: شدت رنگ تولیدشده با استفاده از دستگاه میکروپلیت ریدر اندازه‌گیری می‌شود. نکته مهم این است که در این روش، رابطه بین شدت رنگ و غلظت ویتامین B12 معکوس است؛ یعنی هرچه غلظت ویتامین B12 در نمونه بیشتر باشد، مقدار کمتری از ویتامین B12 کونژوگه‌شده به آنتی‌بادی‌ها می‌چسبد، در نتیجه رنگ کمتری تولید می‌شود.

اجزای کلیدی کیت

یک کیت الایزا ویتامین B12 معمولاً شامل اقلام زیر است:

• میکروپلیت با چاهک‌های پوشش‌داده‌شده: حاوی آنتی‌بادی‌های اختصاصی.
• استانداردها (کالیبراتورها): ویال‌هایی با غلظت‌های مشخص از ویتامین B12 برای رسم منحنی استاندارد.
• کنترل‌ها: نمونه‌های با غلظت بالا و پایین برای کنترل کیفیت آزمایش.
• کونژوگه آنزیمی: ویتامین B12 متصل به آنزیم.
• بافر شستشو و بافر نمونه: برای آماده‌سازی نمونه‌ها و شستشوی چاهک‌ها.
• سوبسترای آنزیمی: برای تولید رنگ.
• محلول متوقف‌کننده: برای پایان دادن به واکنش آنزیمی.

کاربرد بالینی و اهمیت آن

اندازه‌گیری سطح ویتامین B12 در سرم خون از اهمیت بالایی برخوردار است، چرا که کمبود این ویتامین می‌تواند منجر به مشکلات جدی شود. مهم‌ترین کاربردهای این کیت عبارتند از:

• تشخیص کم‌خونی فقر ویتامین B12 (کم‌خونی مگالوبلاستیک): این نوع کم‌خونی به دلیل تولید غیرطبیعی گلبول‌های قرمز بزرگ و ناکارآمد رخ می‌دهد.
• بررسی سلامت سیستم عصبی: کمبود طولانی‌مدت ویتامین B12 می‌تواند به آسیب‌های عصبی، بی‌حسی، سوزن‌سوزن شدن دست و پا و اختلالات شناختی منجر شود.
• غربالگری در گروه‌های پرخطر: افرادی مانند سالمندان، گیاه‌خواران (وگان‌ها)، افرادی با مشکلات گوارشی (مانند بیماری سلیاک یا کرون)، و کسانی که داروهای خاصی مصرف می‌کنند، بیشتر در معرض خطر کمبود B12 هستند.

مشخصات فنی و شرایط نگهداری

• نوع نمونه: بهترین نمونه برای این آزمایش، سرم یا پلاسمای خون است.
• محدوده قابل اندازه‌گیری: این کیت‌ها معمولاً قادر به اندازه‌گیری ویتامین B12 در محدوده خاصی هستند (مثلاً 0 تا 2000 پیکوگرم بر میلی‌لیتر).
• شرایط نگهداری: اجزای کیت باید در دمای ۲ تا ۸ درجه سانتی‌گراد نگهداری شوند تا پایداری خود را حفظ کنند.
• زمان انجام آزمایش: زمان مورد نیاز برای کل فرآیند معمولاً حدود ۹۰ دقیقه است.

به طور کلی، کیت الایزا ویتامین B12 به دلیل دقت بالا، حساسیت مناسب و قابلیت انجام تعداد زیادی آزمایش در زمان کوتاه، ابزاری مطمئن و کارآمد در تشخیص و مدیریت کمبود ویتامین B12 به شمار می‌رود